高效、便捷和低廉的核酸提取技术和方法是核酸分子诊断的关键步骤之一。目前,投入应用的试剂产品很多需利用高速离心机进行核酸提取。这些试剂盒价格较高、操作复杂,在很大程度上制约了核酸分子诊断技术的普及应用。针对这个问题,优思达将采用一种新型的无仪器微量核酸快速提取装置。(图一 1a)
本装置使用能特异性吸附核酸的硅胶膜,籍细胞裂解、物理过滤杂质、核酸吸附、清洗、洗脱过程对各种临床标本的核酸进行提取后制成用于CPA恒温扩增的模板。该装置利用硅胶膜在高盐和低PH值的情况下能特异性吸附核酸,而在低盐和高PH值的情况下能释放核酸的特性,通过改变流经硅胶膜液体的PH以及离子浓度,快速有效地进行核酸提取。 图1:新型无仪器微量核酸快速提取装置和与之配套的标本前处理装置。1a为微量核酸快速提取装置,1b为标本前处理装置。
主要步骤为: 标本裂解:取适量的临床标本加入一定量的细胞裂解液,使病原体裂解并释放出核酸; 杂质过滤:如果是处理含杂质的临床标本,如痰液,须用初过滤装置用物理过滤原理先杂质去除; 核酸吸附:用医用注射器抽吸法使病原体裂解后释放出来的核酸流经装置内的硅胶膜。此时核酸在裂解液高盐和低PH状态下被特异性地吸附在膜上,达到分离核酸目的,而进入抽吸装置的液体则为不含或含有少量核酸成分的废液。将该废液推出丢弃; 膜清洗:废液被推出后,用清洗液在注射器数次抽吸作用下清洗硅胶膜,使附着在上面的杂质(如蛋白质、多糖和一些离子等)被清洗掉,而核酸由于吸附作用依然被保留在硅胶膜上; 核酸洗脱:在清洗液被推出后,采用低盐和高PH的核酸洗脱液,再用注射器抽吸对吸附在硅胶膜上的核酸进行洗脱。洗脱下来的含有核酸的液体即可直接作为后续的核酸恒温扩增的模板。