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全封闭式靶核酸扩增物快速检测装置

    概述:核酸诊断试剂灵敏度高,特异性好,代表着体外诊断试剂的发展方向。但普通PCR检测极易发生实验室交叉污染而造成检测假阳性,因此如何在封闭条件下实现核酸扩增产物的检测以避免污染成为一项研究的重点。荧光定量PCR以密封的方法有效地解决了这个问题,但设备及试剂昂贵,对操作人员的技术要求较高,并不适合广大基层医院。

    优思达公司自主开发的一次性全封闭式靶核酸扩增物快速检测装置(以下简称“检测装置”)提供了一种全新的核酸检测方法。“检测装置”小巧而新颖的设计使得检测过程能在物理密封条件下完成,从而有效地防止了实验室扩增物交叉污染,解决了一个世界性的难题。它操作简单,15分钟就可以肉眼判读结果,具有快速方便、灵敏特异、不需仪器等优点。“检测装置”可配套优思达核酸恒温扩增诊断试剂一起使用,也可作为独立的产品,为制药企业研发及临床研究中的突变位点的检测、搭配诊断(Companion Diagnostics)、临检实验室致病原检测、CDC和检验检疫现场快速检测提供了方便实用的工具。

     检测原理:优思达“检测装置”将通用型核酸检测试纸条置入一个掌上塑料检测装置内。核酸检测试纸条系对已十分成熟的免疫层析显色法技术加以改进,应用包被上特异性的核酸或蛋白质的纳米级胶体金颗粒(或其它有色颗粒)和特别标记的核酸引物及探针,使扩增后的检测产物和胶体金颗粒结合,在试纸条的检测线(T线)上显色来检测DNA扩增产物;如果无目标DNA,特异性探针则将无法把扩增产物与标记物连接,结果无显色,即读为阴性。如图4所示。

    防污染原理:优思达防核酸扩增物污染技术由核酸扩增试剂和上述“检测装置”两部分组合来实现(图5)。核酸扩增试剂在扩增阶段具备双重密封作用,即在单管分装好的试剂表面加上一层矿物油,加入处理后的样品后,就不再打开管盖,从而杜绝了气溶胶的产生,隔绝污染源。“检测装置”则通过内芯与外盒的双重密封,使扩增物不产生外泄,防止实验室交叉污染与假阳性的产生。

图5

装置特点:一次性“检测装置”与电泳等常规核酸检测技术相比有以下优点:
      全封闭检测:不打开扩增反应后的PCR管的管盖,从物理上防止了扩增物的外泄扩增物污染机会降至最低,防止检测假阳性;
      异性强:由于在扩增反应中不但加入了两个特异的引物,而且加入了1~2个特异的探针,检测时需要引物与探针同时作用,因而使检测反应特异性更高;
      保持了扩增后靶核酸扩增物检测的高灵敏度;
      操作简单、快速:整个检测过程只需10~15分钟,而传统的琼脂糖凝胶电泳则至少需要1-2小时;
      目视检测,扩增后检测不需任何仪器设备。